赵   斌

(南京医科大学附属南京市妇幼保健院药剂科,江苏 南京210004)

摘要 目的：建立夜宁糖浆中大黄素的含量测定方法。方法：HPLC法^[1],色谱柱C₁₈，流动相：甲醇—0.1%磷酸溶液85：15(V/V)，流速：1.0ml·min^-1，检测波长：254nm。结果：大黄素在0.01012～0.12144μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 5),平均回收率为97.05%，RSD为1.98%(n=3)。结论：本方法简便、准确、专属性好，能有效控制夜宁糖浆的质量。

关键词：夜宁糖浆；大黄素；高效液相色谱法

Determination of emodin in Yening syrup by HPLC

ZHAO BIN

 (Pharmacy Department,Nanjing Maternal and Child Health hospital of Nanjing Madical University JiangSu NangJing 210004)

ABSTRACT Objective:To establish a simple sensitive HPLC method for determine-

ing emodin in Yening syrup.Methods:HPLC was used, the stationary phase was C₁₈;the mobile phase consisted of methanol-0.1% phosphorilc acid(85:15,V/V);with the flow rate of 1.0ml·min^-1;and detection wavelength at 254 nm. Results:Linear ran-

ge of determination of emodin was 1.012～12.144(r=0.999 5).The average recovery was 97.05% for emodin,RSD was 1.98%. Conclusion: The method is convenient,sen-

sitive and accurate,It can be used for quality control of Yening syrup.

KEY WORDS: Yening syrup;emodin;HPLC

夜宁糖浆^[2]是由合欢皮、灵芝、首乌藤、大枣、女贞子、甘草、浮小麦等药组成，具有安神养心的功效。临床上用于神经衰弱、头昏失眠、血虚多梦，该方现已收载于2005版《中国药典》一部。其质量控制方法简单，只有检查项目,没有含量测定。为了更方便有效地控制该制剂的质量，确保疗效，本文对首乌藤中主要成分大黄素的含量采用HPLC法进行测定，实验结果令人满意。

1 仪器与试药

    Agilent 1100高效液相色谱仪(四元泵、脱气机、紫外检测器), Hypersil

ODS柱(5µm,250×4.6mm)(均为Agilent公司),N2000色谱工作站(浙江大学智能信息研究所),FA1004电子分析天平(上海第二天平仪器厂),PHS-3C精密酸度计(上海雷磁仪器厂), KQ-50B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)等。甲醇为色谱纯,磷酸、乙醚等为分析纯,注射用水(自制)。样品和阴性对照液均由制药厂提供,大黄素对照品(含量测定用)、大黄酸对照品(含量测定用)、大黄酚对照品(含量测定用)、大黄素甲醚对照品(供鉴别用)均由中国药品生物制品检定所提供。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS柱(5µm,250×4.6mm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）(在使用前均经孔径为0.45µm的微孔滤膜过滤,超声处理)；流速：1.0ml·min^-1；检测波长为254nm；柱温：室温；进样量为10µl, 在上述色谱条件下大黄素峰与其它峰分离良好,阴性无干扰,其保留时间为8.2min,理论塔板数按大黄素计算为10000,色谱图见图1～3。

图1 空白样品HPLC色谱图

Fig.1 HPLC chromatograms of blank sample

图2 对照品HPLC色谱图

Fig.2 HPLC chromatograms of standards

图3 供试品HPLC色谱图

Fig.3 HPLC chromatograms of sample

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液  

精密称取大黄素对照品25.3mg至250ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取2ml至50ml容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得。

2.2.2供试品溶液  

精密量取夜宁糖浆25ml,加水50ml,摇匀,加乙醚振摇提取四次(40、30、30、20ml),分取乙醚液,挥干,残渣加甲醇溶解,转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

2.2.3空白样品溶液  

取缺首乌藤的1/10处方量的药材，按夜宁糖浆生产工艺制备空白阴性样品，然后精密量取此液25ml按供试品溶液的的制备方法制备不含首乌藤的的空白阴性样品溶液。

2.3线性关系的考察  

精密称取大黄素对照品25.3mg至250ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀，再分别精密量取此液1、2、4、8、12ml至100ml容量瓶中,摇匀,分别量取10µl注入液相色谱仪,以峰面积积分值为纵坐标,以进样量(µg)为横坐标,绘制标准曲线,结果表明大黄素在0.01012～0.12144µg范围内呈良好的线性关系,线性方程为：Y=21.997736+6334493.527X，r=0.9995。

2.4精密度试验  

精密量取对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积积分值，结果RSD为1.92%。

2.5稳定性试验  

精密供试品溶液10µl，分别在0、2、4、6、8h进样1次，测定峰面积积分值，结果RSD为1.95%,表明供试品溶液中大黄素在8h内基本稳定。

2.6重复性试验  

取样品5份，按3.2项下方法制备供试品溶液,测定大黄素的含量,结果平均含量为2.4µg·ml^-1；RSD为1.68%,结果表明重复性良好。

2.7加样回收率试验  

精密量样品25ml,共4份,其中一份为原样，另三份分别加入1.012µg·ml^-1的大黄素对照品溶液10、20、50ml,混匀, 按3.2项下方法制备所需溶液后,测定大黄素的含量,计算加样回收率。结果平均回收率为97.05%,RSD为1.98%,n=3。

2.8样品测定  

按上述色谱条件的3批样品进行含量测定，结果每ml含首乌藤以大黄素计算分别为0.0028mg、0.0032 mg、0.0035mg,均符合成品质量标准。

3 讨论

3.1色谱条件的确定

   夜宁糖浆中化学成分复杂,检测时易受干扰,本法以大黄素为测定指标,选用甲醇—0.1%磷酸溶液85：15(V/V)作为流动相有较好的分离度,能使样品中所含成分得到较好地分离,不干扰大黄素测定。

3.2样品的处理

  选择样品处理方法时,参考文献资料^[3][4][5],比较了几种处理方法,实验证明,本文采用的样品处理方法,其分离度较好,峰信号较强。

3.3 色谱图中峰位的确认

我们曾用大黄酚、大黄素甲醚对照品制成对照溶液,在同一色谱条件下,注入液相色谱仪,发现大黄酚、大黄素甲醚对照液中大黄酚、大黄素甲醚峰的保留时间分别与夜宁糖浆供试品溶液中10.0min、14.6min峰的保留时间一致,并且我们同时也采用此两种标准液直接加入至供试品溶液中, 在同一色谱条件下,注入液相色谱仪,发现10.0min、14.6min两峰的峰面积明显增加,因此,我们认为夜宁糖浆供试品溶液中10.0min、14.6min出现的两峰为大黄酚、大黄素甲醚峰,可进一步对此两峰进行鉴别与含量测定.

参考文献：

[1].国家药典委员会编.中国药典(2005年版)一部.北京;化学工业出版社；附录33～35.

[2].国家药典委员会编.中国药典(2005年版)一部.北京;　化学工业出版社；正文504.

[3].何建华,沈宇清,韦昌桂等.高效液相色谱法测定通解口服液中大黄素的含量[J].中国医院药学杂志,2006,26(12):1483～1485.

[4].雷光,王登旭.HPLC法测定健脑宁合剂中大黄素的含量[J].齐鲁药事,2006,25(3):152

～153.

[5].曾卫阳,侯小明,段早红.高效液相色谱法测定复方儿茶酊中大黄素的含量[J].医药论坛杂志,2006,27(20):67～68.